組織学的手法・顕微鏡：その他の手法

🧠 パラフィンparaffinパラフィン（paraffin）paraffin（パラフィン）法（00-1-tissue-preparation）でどうしても失われる情報（脂質・酵素活性・迅速性）を補うための「代替ルート」の集合、と位置づけて覚える。 凍結切片frozen section凍結切片（frozen section）frozen section（凍結切片）は「速さ」、脂質染色は「パラフィンparaffinパラフィン（paraffin）paraffin（パラフィン）法で溶けてしまう脂肪」、細胞診・培養・オートラジオグラフィーAutoradiographyオートラジオグラフィー（Autoradiography）Autoradiography（オートラジオグラフィー）は「組織ではなく細胞・分子の動態」を見るための手法——それぞれ何を犠牲にして何を得ているかで整理する。

凍結切片法

パラフィンparaffinパラフィン（paraffin）paraffin（パラフィン）法は脱水・包埋embedding包埋（embedding）embedding（包埋）に時間がかかるため、手術中の迅速診断intraoperative diagnosis迅速診断（intraoperative diagnosis）intraoperative diagnosis（迅速診断）には向かない。凍結切片法Frozen section凍結切片法（Frozen section）Frozen section（凍結切片法）は組織を急速凍結し、クリオスタットcryostatクリオスタット（cryostat）cryostat（クリオスタット）で薄切sectioning薄切（sectioning）sectioning（薄切）することで、数分〜十数分という短時間で標本を作製できる。

⭐ 凍結切片法Frozen section凍結切片法（Frozen section）Frozen section（凍結切片法）の最大の強みは脂質を保持できる点——パラフィンparaffinパラフィン（paraffin）paraffin（パラフィン）法では処理過程で脂質が溶け出してしまう（00-1-tissue-preparation参照）ため、脂肪染色（オイルレッドOil Red Oオイルレッド（Oil Red O）Oil Red O（オイルレッド）Oなど）や一部の酵素組織化学は凍結切片frozen section凍結切片（frozen section）frozen section（凍結切片）でなければ行えない。

細胞診

組織全体ではなく、個々の細胞を対象に形態を評価する手法。剥離細胞診（塗抹標本smear preparation塗抹標本（smear preparation）smear preparation（塗抹標本）、パパニコロウPapanicolaouパパニコロウ（Papanicolaou）Papanicolaou（パパニコロウ）染色 Papanicolaou stain による子宮頸部細胞診cervical cytology子宮頸部細胞診（cervical cytology）cervical cytology（子宮頸部細胞診）など）や穿刺吸引細胞診fine-needle aspiration cytology (FNAC)穿刺吸引細胞診（fine-needle aspiration cytology (FNAC)）fine-needle aspiration cytology (FNAC)（穿刺吸引細胞診）が代表例で、組織構築architecture組織構築（architecture）architecture（組織構築）の情報は失われる代わりに、低侵襲かつ迅速に細胞レベルCellular細胞レベル（Cellular）Cellular（細胞レベル）の異型を評価できる。

細胞培養

生体から取り出した細胞をシャーレ内で増殖させ、生きたまま経時的serial経時的（serial）serial（経時的）に観察・実験する手法。組織を離れた環境での細胞の挙動（増殖・分化・シグナル応答）を調べられる一方、生体内in vivo生体内（in vivo）in vivo（生体内）の微小環境（周囲の細胞・ECM・血流など）を再現できない限界もある。

オートラジオグラフィーとフローサイトメトリー

• オートラジオグラフィーAutoradiographyオートラジオグラフィー（Autoradiography）Autoradiography（オートラジオグラフィー）：放射性同位体radioisotope (radioactive isotope)放射性同位体（radioisotope (radioactive isotope)）radioisotope (radioactive isotope)（放射性同位体）で標識した分子（例：³H-チミジン）を組織・細胞に取り込ませ、放射線による感光を利用してその分子の局在・動態を可視化する手法。DNA合成中の細胞（S期）の同定などに用いられてきた。
• フローサイトメトリーflow cytometryフローサイトメトリー（flow cytometry）flow cytometry（フローサイトメトリー）：蛍光標識fluorescent label蛍光標識（fluorescent label）fluorescent label（蛍光標識）した抗体で細胞集団を染色し、細胞を一つずつレーザー光の中を通過させて蛍光・散乱光scattered light散乱光（scattered light）scattered light（散乱光）を測定することで、大量の細胞を高速に分類・定量する手法。血液細胞・リンパ球サブセットの解析（07-1-cells-general）などに用いられる。

💡 「なぜ手術中に迅速診断intraoperative diagnosis迅速診断（intraoperative diagnosis）intraoperative diagnosis（迅速診断）が必要な場面ではパラフィンparaffinパラフィン（paraffin）paraffin（パラフィン）法を使わないのか」という問いへの答えは単純で、パラフィンparaffinパラフィン（paraffin）paraffin（パラフィン）法は脱水・包埋embedding包埋（embedding）embedding（包埋）だけで数時間かかり、手術の進行に間に合わないから。凍結切片法Frozen section凍結切片法（Frozen section）Frozen section（凍結切片法）は形態の精密さを多少犠牲にしてでも「速さ」を取る手法だと理解しておくと、なぜ両者が併存しているかが腑に落ちる。

まとめ

• 凍結切片法Frozen section凍結切片法（Frozen section）Frozen section（凍結切片法）は急速凍結とクリオスタットcryostatクリオスタット（cryostat）cryostat（クリオスタット）薄切sectioning薄切（sectioning）sectioning（薄切）により迅速診断intraoperative diagnosis迅速診断（intraoperative diagnosis）intraoperative diagnosis（迅速診断）や脂質染色を可能にするが、形態保持の精密さはパラフィンparaffinパラフィン（paraffin）paraffin（パラフィン）法にやや劣る。
• 細胞診は個々の細胞を対象とし、組織構築architecture組織構築（architecture）architecture（組織構築）の情報を失う代わりに低侵襲・迅速な評価ができる。
• 細胞培養cell culture細胞培養（cell culture）cell culture（細胞培養）は生きた細胞の経時観察を可能にするが、生体内in vivo生体内（in vivo）in vivo（生体内）の微小環境を完全には再現できない。
• オートラジオグラフィーAutoradiographyオートラジオグラフィー（Autoradiography）Autoradiography（オートラジオグラフィー）は放射性標識分子marker molecule標識分子（marker molecule）marker molecule（標識分子）の動態を、フローサイトメトリーflow cytometryフローサイトメトリー（flow cytometry）flow cytometry（フローサイトメトリー）は蛍光標識fluorescent label蛍光標識（fluorescent label）fluorescent label（蛍光標識）細胞集団の高速分類・定量を可能にする。