Fluorescence recovery after photobleaching（FRAP）

🧠 光退色後蛍光回復fluorescence recovery after photobleaching (FRAP)光退色後蛍光回復（fluorescence recovery after photobleaching (FRAP)）fluorescence recovery after photobleaching (FRAP)（光退色後蛍光回復）は、局所の蛍光を意図的intentional意図的（intentional）intentional（意図的）に消し、未退色blanching退色（blanching）blanching（退色）分子が移動してくる時間経過time course時間経過（time course）time course（時間経過）から分子の動態を測る。

退色・回復・解析

flowchart TD
  A["<span class='jp-term jp-term-diagram' title='blanching'>退色</span>前の蛍光を記録"] --> B["狭い領域へ高強度光を照射"]
  B --> C["<span class='jp-term jp-term-diagram' title='fluorescent dye'>蛍光色素</span>を不可逆的に<span class='jp-term jp-term-diagram' title='blanching'>退色</span>"]
  C --> D["未<span class='jp-term jp-term-diagram' title='blanching'>退色</span>分子が拡散・輸送で流入"]
  D --> E["蛍光回復曲線を記録"]
  E --> F["回復速度と回復率を推定"]

退色blanching退色（blanching）blanching（退色）直後の低下量、回復の時定数time constant時定数（time constant）time constant（時定数）、最終プラトーplateauプラトー（plateau）plateau（プラトー）を測る。回復速度は拡散係数diffusion coefficient拡散係数（diffusion coefficient）diffusion coefficient（拡散係数）や結合速度、回復率は可動分画mobile fraction可動分画（mobile fraction）mobile fraction（可動分画）を反映する。

回復曲線が意味するもの

速い回復は必ずしも自由拡散だけを意味せず、観察領域の大きさ、膜流動membrane fluidity膜流動（membrane fluidity）membrane fluidity（膜流動）、能動輸送、結合・解離が影響する。回復しない成分は不動分画と解釈できるが、撮像中に生じる追加退色blanching退色（blanching）blanching（退色）も補正する。

FRETとの違い

FRETがnmスケールの近接を測るのに対し、FRAPは時間・空間スケールでの集団的な移動を測る。どちらも蛍光顕微鏡fluorescence microscope蛍光顕微鏡（fluorescence microscope）fluorescence microscope（蛍光顕微鏡）を使うが、問いが異なる。

⚠️ 退色blanching退色（blanching）blanching（退色）パルスが細胞を傷害すると、回復曲線は本来の分子運動を反映しなくなる。

まとめ

• FRAPは局所退色blanching退色（blanching）blanching（退色）後の蛍光回復を時系列time-line時系列（time-line）time-line（時系列）で測定する。
• 回復速度は移動・結合の速さ、回復率は可動分画mobile fraction可動分画（mobile fraction）mobile fraction（可動分画）を反映する。
• 解析には観察領域、追加退色blanching退色（blanching）blanching（退色）、細胞傷害の影響を含める。