Pathology · C/1

血液学の診断法（生検・フローサイトメトリー等）

Diagnostic methods of hematology (biopsy, flow cytometry, histochemical, cytogenetic, molecular diagnosis)

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🧠 全体像：血液病理の診断は単一の検査では完結せず、臨床像＋形態（血液/骨髄/リンパ節）＋表現型（フロー/IHC）＋遺伝型genotype遺伝型（genotype）genotype（遺伝型）（核型/FISH/分子）を統合して初めて疾患単位が確定する。どの検査を選ぶかは「どの細胞が異常か」「どの系統・段階か」「クローン性があるか」「進展度は」という4つの問いから逆算back-calculate逆算（back-calculate）back-calculate（逆算）される。

全体像（血液病理で実際に行うこと）

血液・リンパ系疾患の診断は統合的：

臨床像＋形態＋表現型＋遺伝型genotype遺伝型（genotype）genotype（遺伝型）→ 定義された疾患単位。

つまり「検査」は次の4つの問いに答えるために選ばれる：

どの細胞が異常で、どう見えるか？
どの系統・段階か？
クローン性・特定の遺伝子病変があるか？
進展度は（血液／骨髄／リンパ節）？

検体採取部位（情報がどこから来るか）

末梢血

定量： CBC（Hb、Hct、WBC、血小板）、白血球分画differential白血球分画（differential）differential（白血球分画）。
定性： 末梢血塗抹peripheral smear末梢血塗抹（peripheral smear）peripheral smear（末梢血塗抹）の形態（芽球は？左方移動left shift左方移動（left shift）left shift（左方移動）は？異形成は？溶血所見は？）。

骨髄

相補的な2つの検体：

骨髄穿刺bone marrow aspiration骨髄穿刺（bone marrow aspiration）bone marrow aspiration（骨髄穿刺）（吸引・細胞診）
- 液状検体。細胞の詳細、分画、鉄染色、細胞化学、フローに最適。
コア生検trephine biopsyコア生検（trephine biopsy）trephine biopsy（コア生検）
- 固形検体。全体の構築に最適。
- 細胞密度、線維化、巣状focal巣状（focal）focal（巣状）浸潤、肉芽granulation肉芽（granulation）granulation（肉芽）腫、転移巣metastatic focus転移巣（metastatic focus）metastatic focus（転移巣）、浸潤パターン。

リンパ節

穿刺吸引cytology穿刺吸引（cytology）cytology（穿刺吸引）： 迅速だが情報が限られることも。
切除生検excisional biopsy切除生検（excisional biopsy）excisional biopsy（切除生検）： 構築パターン（濾胞性follicular濾胞性（follicular）follicular（濾胞性）とびまん性、洞浸潤sinusoidal infiltration洞浸潤（sinusoidal infiltration）sinusoidal infiltration（洞浸潤）など）に最適。

細胞化学（酵素染色）—「この芽球は何をするか？」

主に急性白血病acute leukemia急性白血病（acute leukemia）acute leukemia（急性白血病）で用いる酵素反応：
- MPO（ミエロペルオキシダーゼmyeloperoxidase (MPO)ミエロペルオキシダーゼ（myeloperoxidase (MPO)）myeloperoxidase (MPO)（ミエロペルオキシダーゼ））
- SBB（Sudan Black B）
- NaAc（ナフトールAS-Dクロロアセテートエステラーゼnaphthol AS-D chloroacetate esteraseナフトールAS-Dクロロアセテートエステラーゼ（naphthol AS-D chloroacetate esterase）naphthol AS-D chloroacetate esterase（ナフトールAS-Dクロロアセテートエステラーゼ））
形態が不明瞭なとき、骨髄系myeloid骨髄系（myeloid）myeloid（骨髄系）とリンパ系の分化を分けるのに役立つ。

フローサイトメトリー（細胞浮遊液の免疫表現型）

定義： 細胞・粒子集団の物理的・化学的特性を検出・測定する手法。

抗体で系統と成熟段階を定義する。
典型的用途：血液・骨髄・吸引液の白血病・リンパ腫。

免疫組織化学（組織切片の免疫表現型）

組織検体（生検）上に抗体を適用。
リンパ腫の分類、組織内の細胞系統の同定に役立つ。

系統特異的マーカー（例）

顆粒球：CD33、CD13、CD15
赤芽球系erythroid lineage赤芽球系（erythroid lineage）erythroid lineage（赤芽球系）：Glycophorin A
巨核球megakaryocyte巨核球（megakaryocyte）megakaryocyte（巨核球）：CD41（GPIIb）・CD61（GPIIIa）・CD42b（GPIbglycoprotein IbGPIb（glycoprotein Ib）glycoprotein Ib（GPIb）α）。CD41/CD61はヘテロ二量体heterodimerヘテロ二量体（heterodimer）heterodimer（ヘテロ二量体）を作る早期マーカー、CD42bは後期マーカーで、骨髄の巨核球megakaryocyte巨核球（megakaryocyte）megakaryocyte（巨核球）定量はCD41/CD61の免疫染色が標準である。⚠️ 原著は「CD64」としているが、CD64（FcγRI）は単球・マクロファージ系のマーカーであり巨核球megakaryocyte巨核球（megakaryocyte）megakaryocyte（巨核球）のマーカーではない。
単球：CD14
B細胞：CD19、CD20、CD49a
T細胞：CD3、CD2、CD5、CD4/CD8
NK細胞：CD56、グランザイムgranzymeグランザイム（granzyme）granzyme（グランザイム）B、TIA-1

急性白血病・未熟性を示すマーカー

CD34、TdT

細胞遺伝学

主に2つの「レベル」：

分裂中期metaphase分裂中期（metaphase）metaphase（分裂中期）細胞遺伝学Cytogenetics細胞遺伝学（Cytogenetics）Cytogenetics（細胞遺伝学）（核型）： 大きな染色体異常。
分裂間期interphase間期（interphase）interphase（間期）FISH： 標的を絞った検出
- 数の変化（例：トリソミー）
- 欠失（例：del(5q)）
- 転座（例：t(14;18)）
- 増幅（例：c-MYC）

分子診断

DNA/RNAレベルの病変を検出：
- 転座・融合遺伝子
- 点変異（例：JAK2 V617F）
- 発現プロファイリング
- 遺伝子シークエンスsequenceシークエンス（sequence）sequence（シークエンス）

💡 ポイント： 血液病理の診断は_統合的_：形態（血液/骨髄/リンパ節）＋免疫表現型Immunophenotype免疫表現型（Immunophenotype）Immunophenotype（免疫表現型）（フロー/IHC）＋遺伝（核型/FISH/分子）→ 最終的な疾患単位。

まとめ

血液・リンパ系疾患の診断は臨床像・形態・表現型・遺伝型genotype遺伝型（genotype）genotype（遺伝型）を統合して行う。
検体は末梢血（定量CBC・定性塗抹）、骨髄（穿刺＝細胞の詳細、コア生検trephine biopsyコア生検（trephine biopsy）trephine biopsy（コア生検）＝構築）、リンパ節（穿刺吸引cytology穿刺吸引（cytology）cytology（穿刺吸引）または切除生検excisional biopsy切除生検（excisional biopsy）excisional biopsy（切除生検））から得る。
細胞化学（MPO、SBB、NaAc）は形態が不明瞭なとき骨髄系myeloid骨髄系（myeloid）myeloid（骨髄系）とリンパ系の分化を区別する補助になる。
フローサイトメトリーflow cytometryフローサイトメトリー（flow cytometry）flow cytometry（フローサイトメトリー）は細胞浮遊buoyancy浮遊（buoyancy）buoyancy（浮遊）液の免疫表現型Immunophenotype免疫表現型（Immunophenotype）Immunophenotype（免疫表現型）を、免疫組織化学immunohistochemistry (IHC)免疫組織化学（immunohistochemistry (IHC)）immunohistochemistry (IHC)（免疫組織化学）は組織切片tissue section組織切片（tissue section）tissue section（組織切片）上の免疫表現型Immunophenotype免疫表現型（Immunophenotype）Immunophenotype（免疫表現型）を評価する。
細胞遺伝学Cytogenetics細胞遺伝学（Cytogenetics）Cytogenetics（細胞遺伝学）は分裂中期metaphase分裂中期（metaphase）metaphase（分裂中期）核型（大きな染色体異常）と分裂間期interphase間期（interphase）interphase（間期）FISH（数の変化・欠失・転座・増幅）の2レベルがある。
分子診断molecular diagnostics分子診断（molecular diagnostics）molecular diagnostics（分子診断）はDNA/RNAレベルの転座・融合遺伝子・点変異・遺伝子シークエンスsequenceシークエンス（sequence）sequence（シークエンス）を検出する。